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青旗與您分享人elisa試劑盒的操作方法

發布時間: 2021-09-24  點擊次數: 1310次
  人elisa試劑盒自從60-70年代問世以來,得到科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內生化領域的長足發展。elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。人elisa試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。
 
  人elisa試劑盒的操作方法:
  雙抗體夾心法:
  1、包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。
  2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。
  3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
  4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
  5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
  6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
  間接法:
  1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
  2、次日洗滌3次;
  3、加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
  4、于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
  5、37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
  6、最后一遍用DDW洗滌。
  其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。




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